為什么細(xì)菌染色液是堿性的?具體操作步驟又有哪些?
細(xì)菌染色液是利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡便,適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。
細(xì)菌染色液為堿性染料這是因?yàn)椋涸谥行浴A性或弱酸性溶液中,細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷,而堿性細(xì)菌染色液在電離時(shí),其分子的染色部分帶正電荷,因此堿性細(xì)菌染色液的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著。染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的對比,在顯微鏡下較易于識別。
細(xì)菌染色液的具體操作步驟:
1、涂片
a、取一塊干凈的載玻片,平放,在載玻片*滴一小滴生理鹽水。
b、用接種環(huán)無菌操作從瓊脂斜面上挑取適量菌苔。
c、將挑取的菌苔沾入載玻片*生理鹽水中混勻并涂成薄膜。
2、干燥
將涂好菌膜的載玻片平放在室溫下自然干燥。也可用電吹風(fēng)低溫吹干。
3、固定
手持(木夾夾住)已干燥的涂有菌膜的載玻片,涂面朝上,在酒精燈火焰上通過2~3次。
原理:加熱使細(xì)菌細(xì)胞的蛋白質(zhì)凝固,從而固定細(xì)菌細(xì)胞形態(tài),并使之牢固附著在載玻片上。
細(xì)菌染色液
4、染色
將熱固定的細(xì)菌涂片平放于在載玻片架上,滴加染液于涂片上。
染色時(shí)間:呂氏堿性美藍(lán)染色1~2min;石炭酸復(fù)紅染色約1min;草酸銨結(jié)晶紫染色約1min。
5、水洗
將細(xì)菌涂片上染液倒入廢液缸中;手持細(xì)菌染色涂片,置于廢液缸上方,用洗瓶中自來水沖洗涂片,直至流下的水無色為止。
6、干燥
自然干燥:平放于室溫,自然干燥。
吹干:用電吹風(fēng)冷風(fēng)或低溫?zé)犸L(fēng)吹干。
吸干:平放在一張吸水紙上,上面覆蓋一張吸水紙,將細(xì)菌涂片兩面水分吸干。
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