Rab5C kit-武漢紐斯特生物技術(shù)

檢測(cè)原理
武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司的cd*2活性檢測(cè)*盒主要是利用識(shí)別蛋白特異形態(tài)的cd*2-gtp單克l隆*l體特異性的去檢測(cè)細(xì)胞提取物或者體外的（樣品需要進(jìn)行g(shù)tpγs活化處理）活性cd*2-gtp的水平。簡(jiǎn)言之，特異性識(shí)別cd*2活化構(gòu)象的鼠單克l隆*l體可以特異性結(jié)合細(xì)胞裂解液中的cd*2-gtp活性蛋白，然后利用protein a/g將*原*l體的結(jié)合物吸附下來(lái)，再利用特異性識(shí)別cd*2活化構(gòu)象的兔多克l隆*l體進(jìn)行免l疫印跡分析進(jìn)行檢測(cè)。
武漢紐斯特生物科技有限公司（wuhanneweastbiotechonologyco.ltd），系美國(guó)生命科學(xué)*供應(yīng)商美國(guó)neweastbio在中國(guó)的子公司。美國(guó)neweastbio專(zhuān)注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，主要產(chǎn)品有小分子、elisa*盒、蛋白等。
懸浮細(xì)胞
1.培養(yǎng)細(xì)胞并根據(jù)需要用活化劑或*l劑刺激。
2.進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，rab5c kit，然后通過(guò)離心沉淀細(xì)胞。
3.吸出培養(yǎng)基，并用冰冷的pbs洗滌兩次。
4.完全除去pbs洗滌液，然后向細(xì)胞沉淀中加入冰冷的1x分析/裂解緩沖液
（每1 x 107池0.5 – 1 ml）。
5.通過(guò)重復(fù)移液裂解細(xì)胞。
6.將裂解物轉(zhuǎn)移至適當(dāng)大小的試管中，并置于冰上。
7.如果發(fā)生核裂解，則細(xì)胞裂解液可能變得非常粘稠，難以移液。如果這
發(fā)生時(shí)，裂解液可通過(guò)27?號(hào)注射l器針頭3-4次以剪切
*組dna。
8.通過(guò)離心10分鐘（在4°c下為12，000 x g）清除裂解物。
9.收集上清液并將樣品保存在冰上以備立即使用，或速凍并保存在-
70°c以備將來(lái)使用。
陽(yáng)性和陰性對(duì)照的體外gtpγs/ gdp蛋白質(zhì)上樣量
注意：體內(nèi)刺激細(xì)胞會(huì)激l活大約10％的可用rab35，而
體外gtpγs蛋白負(fù)載將激l活近90％的rab35。
1.將0.5 ml每種細(xì)胞提取物等分到兩個(gè)微量離心管中（或使用1 μg純化的rab35蛋白）。
2.向每個(gè)試管中加入20 μl 0.5 m edta（至20 mm終濃度）。
3.將5 μl 100 xgtpγs（至100 μm，終濃度）加到一個(gè)試管中（陽(yáng)性對(duì)照）。
4.在第二個(gè)試管中加入5 μl 100 x gdp（至1 mm，終濃度）（陰性對(duì)照）。
5.在攪拌下將試管在30°c孵育30分鐘。
6.通過(guò)將試管放在冰上并添加32.5 μl 1 m mgcl2（至60 mm）。
當(dāng)前沒(méi)有直接測(cè)定法來(lái)測(cè)量arl1 gtpases的激l活。
neweast biosciences arl1激l活檢測(cè)*盒基于特定于配置的單克l隆*l體，該*l體特異性識(shí)別arl1-gtp，但不能識(shí)別arl1-gdp。 鑒于單克l隆*l體對(duì)其*原的高度親和力，可以在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行激l活測(cè)定。 該測(cè)定法可提供可靠的結(jié)果，并具有一致的可重復(fù)性。
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